標(biao)準(zhun)(zhun)品(pin)(pin)是標(biao)記免疫分析定量(liang)的(de)依據。標(biao)準(zhun)(zhun)品(pin)(pin)的(de)正確與否直接影響樣品(pin)(pin)的(de)測(ce)定結(jie)果。如(ru)果在連續(xu)測(ce)定中，或各實(shi)驗室之間使用(yong)(yong)的(de)標(biao)準(zhun)(zhun)品(pin)(pin)不一致(zhi)，則可影響到(dao)實(shi)驗結(jie)果的(de)可比性。為此(ci)，對標(biao)記免疫分析所使用(yong)(yong)的(de)標(biao)準(zhun)(zhun)品(pin)(pin)應(ying)滿(man)足如(ru)下要(yao)求。

1．化學結構：原則上標準品應與被測物具有完全相同的化學結構，包括相同的立體化學結構。但在實際工作中，用化學結構完全相同的物質作標準品是十分困難的。這是由于一方面來源有限，另一方面有些被測物本身的化學結構還不清楚，或是有明顯的異型性。所以有時也用結構類似的物質作標準品。此時，應充分了解這些物質與真正標準品之間的定量關系。

2．化學純度：所有通過化學合成法制備的小分子化合物，都應是高化學純度的純品。對某些蛋白類物質，則可能由于純化的方法不同而有差異。對此，在最初建立該方法時，應與國際上公認的標準參考品或高純度的純品進行比對。

3．免疫純度：標記免疫分析是通過比較被測物質與標準品的免疫活性實現的，故被測物質與標準品對所用抗體的免疫活性應該完全一致，即兩者對所用的同一抗體有完全相同的親和力。因此，標準品的免疫純度比其化學純度更重要。

4．反應介質：免疫學反應受反應介質和溫度等條件的影響，所以理論上要求標準品和被測物應在完全相同的介質中進行反應。如測定血清中某物質的濃度，其所用的標準品也應溶解在無被測物的零值血清中；如測定尿液中某物質的濃度，其所用的標準品也應溶解在無被測物的尿液中等。但在實際工作中這一點很難做到。因為，血清中的成分十分復雜，因而無被測物的零值血清的制備非常困難，而且個體血清中還可能存在一些干擾物質。理想的標準品應該用與被測樣品相同的基質(如血清)，先將被測物質完全去除，然后再加入已知量的被測物質的純品。

5．干擾物質：標準品中不能有干擾分析的物質。在作為標準品使用前，必須對那些從機體提取到的大分子物質活性進行測定。

6．標準品的批量：為保證檢測的連續可比性，每批標準品應有相當大的量，以保證在較長的時間內使用。每批標準品如保存的條件適當，在相當長的時間內可保持其濃度和免疫活性的穩定。這對于生產標記免疫分析試劑的廠家尤為重要。

二．標準品的分級

所謂標(biao)準(zhun)品在(zai)英語中有三個名詞(ci)，即標(biao)準(zhun)品(standard)、校(xiao)準(zhun)品(calibrator)、和參(can)考品(reference)。這(zhe)三個名詞(ci)的(de)(de)意義(yi)不完全相同(tong)，但在(zai)國內(nei)它們則經(jing)常被混(hun)淆。目前在(zai)我國的(de)(de)標(biao)記免疫分析實踐中，所謂的(de)(de)"標(biao)準(zhun)品"實際上是(shi)指校(xiao)準(zhun)品。為使用(yong)方便(bian)先(xian)仍用(yong)"標(biao)準(zhun)品一(yi)詞(ci)"。

有關標準品可分為如下的等級：

【國際參考品(international reference)】：國際參考品是由WHO指定的實驗室制備，并與有關國家的一定機構聯系(在我國是衛生部藥品與生物制品檢定所)，被國際公認為最高級別的標準品。到目前為止，與標記免疫分析有關的已達數十種。但由于標記免疫分析方法的迅速發展，很多標記免疫分析方法還沒有國際參考品。

【國家級標準品】：國(guo)(guo)家(jia)(jia)級(ji)(ji)標(biao)準品(pin)是(shi)由國(guo)(guo)家(jia)(jia)的(de)有(you)關權(quan)威機構，用高(gao)化學純和高(gao)免疫純、低交叉(cha)反應的(de)純品(pin)制備的(de)，供(gong)國(guo)(guo)家(jia)(jia)內(nei)部使用。國(guo)(guo)家(jia)(jia)級(ji)(ji)標(biao)準品(pin)應與國(guo)(guo)際參(can)考品(pin)或其他國(guo)(guo)家(jia)(jia)的(de)國(guo)(guo)家(jia)(jia)級(ji)(ji)標(biao)準品(pin)進行比(bi)對。我(wo)國(guo)(guo)現已有(you)國(guo)(guo)家(jia)(jia)級(ji)(ji)標(biao)準品(pin)數種，如胰(yi)島素(insulin)、絨毛膜促性腺素(hCG)、三碘甲狀腺原氨酸(suan)(suan)(T3)、甲狀腺素(T4)、肝膽酸(suan)(suan)(CG)、甲胎蛋白(AFP)等。

【實驗室標準】：實驗室標準是由實驗室自己，或由生產廠家制備的標準品，又稱二級標準品。所有的二級標準品都必須經過與國家標準品或國際參考品進行比對或校正。如沒有國際參考品或國家級標準品的，也應與國際公認的生產廠家的標準品進行比對。

三、標準品的制備、鑒定、與計量

1．標準品的制備：標準品的制備是非常復雜的問題，也是標記免疫分析中比較難于制備的一個成分。以下討論的是實驗室標準品(或商品化試劑中標準品)的制備。

1）基質的制備：如前所(suo)述，作為標準品的(de)(de)介質(zhi)(zhi)(基質(zhi)(zhi))成(cheng)分應與被測樣品相同。對大(da)多數用于測定(ding)(ding)血清(qing)中(zhong)某物質(zhi)(zhi)的(de)(de)標準品，應用不(bu)含被測物質(zhi)(zhi)的(de)(de)零血清(qing)制(zhi)備，以求反應的(de)(de)介質(zhi)(zhi)環境(jing)相當。但有(you)時(shi)零值血清(qing)的(de)(de)制(zhi)備十(shi)分困難，所(suo)以有(you)些標準品用適當的(de)(de)緩(huan)沖(chong)(chong)液制(zhi)備，并在(zai)緩(huan)沖(chong)(chong)液中(zhong)加入一定(ding)(ding)量的(de)(de)載體蛋白(一般(ban)用1%～2%的(de)牛血清白(bai)(bai)蛋(dan)白(bai)(bai))，以(yi)便使其與樣品(pin)的(de)介質(zhi)環境相近。

零值血清的制備方法有：

1)吸(xi)附(fu)法：血清中小分子(zi)物質如三碘(dian)甲狀(zhuang)腺原氨(an)酸(T3)、甲狀(zhuang)腺素(T4)等，可用活性炭吸(xi)附(fu)去除。這種方(fang)法簡便(bian)，但(dan)待測物質難以清除干凈，而且大分子(zi)活性物質不(bu)能用此(ci)法進行(xing)制備。

(2)反復凍(dong)融法：對大分子(zi)活性物質(zhi)可選用低值血(xue)清(qing)，經反復凍(dong)融使被(bei)測物質(zhi)失(shi)活。用這(zhe)種方法可使某些蛋白類(lei)激素大部分失(shi)活，但(dan)也難以(yi)得到真正的零值血(xue)清(qing)。

(3)親和層析法：用(yong)特異性抗體制備親和層析柱，用(yong)以吸(xi)附被測抗原(yuan)。用(yong)這種方法可(ke)以得到(dao)高質量的零值(zhi)血清(qing)，但本法比(bi)較復雜而且(qie)成本也高。

2）標準物純品的選擇：應選擇高化學純和高免疫純的純品作標準品。其中免疫純尤為重要，在標準品中不應含有與被測物質有交叉反應的物質。

3）標準品的制備：先用零值血清配置高濃度的標準品，然后根據實驗系統的要求，用零值血清將高值血清稀釋至應有的濃度，制成符合預定要求的，由不同濃度組成的系列標準品。

2．標準品的鑒定

1）免疫活性的鑒定：選(xuan)用高特異(yi)性的(de)(de)抗血清分(fen)別作公(gong)認標準品(pin)(如(ru)WHO的(de)(de)國(guo)(guo)際參考品(pin)或國(guo)(guo)家標準品(pin))的(de)(de)待鑒定標準品(pin)的(de)(de)劑量反應曲線，并觀(guan)察兩(liang)(liang)條(tiao)曲(qu)線(xian)的(de)平行性(xing)。如兩(liang)(liang)條(tiao)劑(ji)量(liang)反(fan)應(ying)曲(qu)線(xian)平行，說明(ming)兩(liang)(liang)種物(wu)質對(dui)同(tong)一抗(kang)體(ti)有相(xiang)同(tong)的(de)親和力，即二者是同(tong)質性(xing)物(wu)質。如兩(liang)(liang)條(tiao)劑(ji)量(liang)反(fan)應(ying)曲(qu)線(xian)不平行，說明(ming)兩(liang)(liang)種物(wu)質具有異質性(xing)，因而這(zhe)一待鑒定的(de)標準(zhun)品是不能使用的(de)。

2）濃度的標定：用已鑒定過的，免疫活性合格的標準品，與公認的標準品作濃度相同的劑量反應曲線。此時，兩條劑量反應曲線應該是基本重合的。如果兩者平行但不重合，則取兩條劑量反應曲線的50%結合處的相應劑量( **** )計算二者的換算系數，然后調整待鑒定標準品的濃度，直至使兩條劑量反應曲線完全或基本重合為止。

3．標準品的計量：

許多小分(fen)子抗原或(huo)半抗原已能(neng)得到(dao)純(chun)品或(huo)進行合成，它們對作為標準品的(de)(de)要求可以(yi)得到(dao)基本的(de)(de)滿(man)足，其計量多直(zhi)接用單位體積中的(de)重(zhong)量(liang)表(biao)示，如(ru)mg / ml、ng / ml 、pg / ml等(deng)(deng)。最近WHO推薦用質(zhi)量(liang)單(dan)位取代重(zhong)量(liang)單(dan)位，即(ji)mol / L、mmol / L、或(huo)nmol / L等(deng)(deng)。對大分子的(de)活性物(wu)質(zhi)則比較復雜。由于得不(bu)到絕對的(de)純品，故很難直(zhi)接用單(dan)位體積中的(de)重(zhong)量(liang)或(huo)單(dan)位體積中的(de)質(zhi)量(liang)計量(liang)。因此，常用該物(wu)質(zhi)的(de)生物(wu)活性單(dan)位表(biao)示，如(ru)IU / L、mIU / L等(deng)(deng)。

四．標準品的穩定性與保存

如前(qian)所述(shu)，為保(bao)(bao)證檢測的連續可比(bi)性，每(mei)批標準(zhun)品應有相當大的量，以保(bao)(bao)證能(neng)在較長時(shi)間內使用。因此，每(mei)批標準(zhun)品應在適當的條件下保(bao)(bao)存(cun)，使其免疫活性和濃度保(bao)(bao)持穩(wen)定。

1．影響標準品穩定的因素

1）基質(zhi)中的酶、細菌污染、pH的變化(hua)(hua)、氧化(hua)(hua)、潮濕等因素(su)都可(ke)以(yi)導致(zhi)標準(zhun)品的變性，而且這些變化(hua)(hua)可(ke)因高溫和光照(zhao)加(jia)速(su)。

2）在保存過程中發生聚合(he)反應(ying)等分子結構的變化(hua)，可使標準品(pin)失活。

3）容器內(nei)壁的吸附(fu)作用和(he)溶劑的蒸(zheng)發可造成標準品(pin)濃度的改(gai)變。

4）保存條(tiao)件不適當也可以影響(xiang)標(biao)準(zhun)品的(de)(de)穩定性，如反復的(de)(de)凍融可降(jiang)低(di)標(biao)準(zhun)品的(de)(de)免疫活性等。

2．標準品的保存方法

1）冷凍(dong)(dong)干燥法：冷凍(dong)(dong)干燥對標準品的(de)濃(nong)度和免疫(yi)活性無明顯的(de)影(ying)響，是目(mu)前最(zui)常用(yong)的(de)保存方法。冷凍(dong)(dong)干燥制品在低溫下，可(ke)在較長(chang)的(de)時(shi)間內(nei)保持穩定。但應用(yong)冷凍(dong)(dong)干燥制品時(shi)，復(fu)溶(rong)體積的(de)準確度十分(fen)重(zhong)要(yao)。因此，要(yao)用(yong)經過校準的(de)量器準確的(de)復(fu)溶(rong)，以減少標準品的(de)濃(nong)度誤差。

2）在標準品中(zhong)加(jia)一定量的(de)防腐劑可(ke)減少(shao)細菌(jun)污染的(de)影響。

3）密閉(bi)真空(kong)保存(cun)或充入惰性氣體等方法(fa)(fa)也可(ke)以增加(jia)標(biao)(biao)準品的穩定性。目前最(zui)常用的方法(fa)(fa)是：在標(biao)(biao)準品中加(jia)入少(shao)量的防(fang)腐劑(如0.1%疊(die)氮鈉或0.1%硫柳(liu)汞)，冷凍(dong)干(gan)燥后(hou)密封，并在低溫(wen)下(xia)保存(cun)。但應注意，一旦復溶后(hou)應放低溫(wen)保存(cun)，并不(bu)得反復凍(dong)溶。復溶后(hou)的標(biao)(biao)準品其有(you)效期明顯(xian)縮短，一般不(bu)超過6～8周，有(you)些物質可(ke)能更(geng)短。